老鼠每天的活动时间基本上是固定的，有很好的规律性，只是随着季节的变化，而进行有规律地调整和变化。家鼠和部分田鼠的活动大多在夜晚，部分在白天活动，每天到了这个时间就纷纷出洞入洞活动起来。一些有夏眠和冬眠习惯的老鼠，每年到了一定的季节和时间也就会按规律进行。
老鼠出洞盗食活动时一般都有固定路线，没有特殊情况不会改道，一旦改道就不再走老路。家鼠一般一条路出洞，出洞前，头部探出洞口先探听几秒钟，在它未发现敌情时猛窜出洞口，沿着墙根、家具夹行走。如果在走道上放上食物，老鼠就绕道走，并注意观察周围的变化，经过一个侦查阶段后它才敢试尝。野外田鼠的活动也有一定路线，一般不会满地跑。
老鼠善于掘洞，洞挖得又快又好，多在僻静和寻找食物方便的地方挖洞做窝。有的鼠洞很隐蔽，难于发现，有的洞道复杂，洞口多，四通八达。不同种类的老鼠挖洞的本领也有差异，有的甚至差异很大。
老鼠具有一定的抗药能力，甚至有的老鼠还具有遗传性的抗药能力。通过对老鼠生理具有抗药力的了解，就需要加速对新灭鼠剂的探索、研究，使用现有的灭鼠剂毒鼠时也要科学使用，要放准、量足和不断交替使用药剂。